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              非洲豬瘟病毒微流控快速熒光PCR檢測試劑盒

              產品編號:AP0002

              檢測方法:實時熒光PCR

              檢測樣品:多樣品

              規格:40T


                

              非洲豬瘟病毒微流控快速熒光PCR檢測試劑盒




              非洲豬瘟病毒微流控熒光PCR快速檢測試劑盒

              LabChip Ultra Fast Fluorescence PCR Detection Kit for African Swine Fever Virus



              【預期用途】

              非洲豬瘟(African swine fever, ASF)是由非洲豬瘟病毒(ASFV)引起豬的一種急性、熱性、高度接觸性動物傳染病,臨床上以高熱、網狀內皮系統出血和高死亡率為特征,易感豬群的病死率高達100%。我國將其列為一類動物疫病,世界動物衛生組織(OIE)將其列為法定報告動物疫病,并且列入《禁止生物武器公約》核查動物病原體清單。

              本試劑盒用于對樣品中的非洲豬瘟 DNA 進行快速定性檢測,可用于該病毒感染的實驗室診斷和現場檢測。檢測結果僅供臨床參考,不能單獨作為確診或排除病例的依據。實驗操作人員應接受過基因擴增或分子生物學方法檢測的專業培訓,具備相關的實驗操作資格。

              【檢測原理】

              本試劑盒利用實時熒光PCR技術,以非洲豬瘟病毒基因組的高度保守區為靶區域,設計特異性引物及探針,探針標記FAM熒光素,配以Taq DNA 聚合酶等成分,使用配套的極速熒光PCR設備進行 PCR擴增,從而對樣品中非洲豬瘟病毒DNA 進行快速定性檢測。

              【主要組成成份】

              試劑名稱

              規格

              樣本處理液A

              1300μl×1

              樣本處理液B

              1300μl×1

              DNA聚合酶

              20μL×1

              PCR反應液

              280μL×1

              陰性對照

              200μL×1

              陽性對照

              200μL×1

              注:不同批號試劑盒的成份不可以互換使用。

              【包裝規格】

              40頭份/

              【儲存條件及有效期】

              試劑于-20℃儲存;反復凍融不超過 5 次;有效期12個月。

              【適用儀器】

              ZR-LC16/ V280 / UF-150型微流控極速熒光定量PCR儀。

              【樣品要求】

              1.適用標本類型:血液、組織、血粉、飼料等。

              2.標本采集與處理

              1)血液樣品:用EDTA抗凝采血管采集血液,充分混勻,編號備用。

              2)組織樣品:用無菌剪刀和鑷子剪取病死或剖殺豬主要臟器(淋巴結、脾臟、扁桃體)約2g,加入10倍體積PBS或生理鹽水,于研缽或組織勻漿器中充分研磨后轉入1.5 mL離心管中編號備用。

              3)血粉:同上處理,只不過省掉研磨步驟。

              4)飼料等其它樣品:參照專用的商品化提取試劑盒的說明書操作。

              3.樣本的儲存

              樣品可立即用于檢測,如不能立即檢測,在 4℃保存不超過 24 小時,-20℃保存不超過3個月,-70℃可長期保存,反復凍融不超過 5 次。

              【檢測方法】

              一、病毒DNA的提取

              1)待檢樣品份數總和用n表示 ,取n個滅菌的離心管,逐管編號。

              2)每管加入處理液A 30μl。

              3)每管分別加入已處理的待檢樣品3μl,充分混勻,18-25℃處理5分鐘,旋渦震蕩30秒。

              4)每管加入處理液B 30μl,震蕩混勻,待檢。

              5)處理后的樣本如在2小時內進行下一步試驗,請于4℃保存,如不能立即進行下一步試驗,請于-20℃保存。

              備注:飼料等其它樣品,此步驟同樣參照專用的商品化提取試劑盒的說明書操作。

              二、PCR試劑配置(在試劑準備區進行)及加樣(在樣品處理區進行)。

              1. 在試劑準備區,按下列組成配制PCR 混合液(n為待測樣本數+1陽性對照+1陰性對照):

              試劑名稱

              n份用量(10μl體系)

              PCR反應液

              7μl×n

              DNA聚合酶

              0.5×n

              (注意:使用前確保PCR反應液和DNA聚合酶充分融化)

              2. PCR混合液按7μl/ 分裝至PCR反應管中,并移至樣品處理區。

              3. 用帶濾芯的吸嘴分別取已處理好的樣品、陰性對照、陽性對照各3μl分別加到裝有 PCR混合液的反應管中漩渦混勻、瞬時離心。

              4. 使用UF-150型號的儀器,各取 10μl 加入PCR 擴增芯片中,蓋上芯片膜,移至擴增檢測區。

              使用V280、ZR-LC16型號的儀器,各取 8μl 加入PCR 擴增芯片中,蓋上芯片蓋,移至擴增檢測區。

              三、PCR擴增檢測(在擴增檢測區進行)

              1. PCR 芯片插入微流控極速熒光定量PCR儀中進行擴增檢測。

               

               

              2. 循環參數設定:

               

              循環數

                ()

                (min:sec)

              收集熒光

              信號

              1

              1

              95

              01:00

              2

              40

              95

              00:07

              60

              00:14

              3. 儀器檢測通道選擇:熒光信號選擇FAM 通道。

              四、質控標準

              1. 陰性對照:結果為陰性。

              2. 陽性對照:結果為陽性,陽性對照 Ct ≤33。

              3. 以上兩項需在一次實驗中同時滿足,否則,本次實驗無效,實驗應重新進行。

              五、結果分析

              1. 實驗結束后,根據相關儀器的軟件進行分析,調節噪聲容限至基線噪聲以上,使陰性對照 Ct 值不出現任何數值。

              2. 閾值設定原則以閾值線剛好超過正常陰性對照曲線(無規則的噪音線)的最高點為準。

              3. 記錄儀器自動分析計算出的樣品 Ct 值。

              【臨界值】本試劑盒的臨界值為Ct= 38。

              【檢測結果的解釋】

              1. 每次實驗均需將試劑盒內的陰性對照、陽性對照與待檢樣品一同檢測,檢測結果應符合其性能指標,否則本次實驗無效。

              2. 實驗結果判斷方法

              2.1陰性結果判定:如果樣品在 FAM 通道擴增曲線均不呈 S 型、Ct 值為 UNDET 或者>38.00。

              2.2.陽性結果判定:如果樣品在 FAM 通道擴增曲線呈型且Ct ≤38,則結果為陽性。

              3. 在質控正常的前提下,實驗結果判讀模式

              3.1陽性樣品報告格式為:樣品檢測到非洲豬瘟病毒DNA,濃度高于試劑盒的檢測限;

              3.2陰性樣品報告格式為:樣品未檢測到非洲豬瘟病毒DNA,濃度低于試劑盒的檢測限。

               


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