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              雞H9亞型禽流感抗體檢測試劑盒(間接ELISA)




              產品編號:100606


              檢測方法:Elisa試驗


              檢測樣品:血清


              規格:96T/192T





                

              雞H9亞型禽流感抗體檢測試劑盒(間接ELISA)





              H9亞型禽流感抗體檢測試劑盒

              使用說明書

              版號:H9 se161120

              介紹

              H9亞型禽流感抗體檢測試劑盒檢測雞血清中的H9亞型禽流感抗體,用于評估養雞場雞禽流感疫苗免疫狀況及感染雞的血清學輔助診斷。

              本試劑盒采用間接ELISA法,在酶標板微孔上預包被H9禽流感抗原。在試驗中,加入稀釋后的待檢血清,經過溫育后,若樣品中含有H9禽流感特異性抗體,則與包被板上的抗原結合,經洗滌除去未結合的抗體和其他成分后;加入酶標二抗,與檢測板上的抗原抗體復合物發生特異性結合;再經洗滌除去未結合的酶結合物;在微孔中加入TMB底物液,經酶催化形成藍色產物,加入終止液終止反應后,用酶標儀450nm波長測定反應孔中的吸光度A值。

               

              組份

              1

              抗原預包被板條

              1/2

              7

              陰性對照

              0.8/1.6ml

              2

              酶結合物

              11/22ml

              8

              陽性對照

              0.8/1.6ml

              3

              10倍濃縮洗滌液

              100ml

              9

              血清稀釋

              1/2

              4

              顯色液

              11/22ml

              10

              封板膜

              2/4

              5

              樣本稀釋液

              50/100ml

              11

              說明書

              1

              6

              終止液

              11ml




              需自備的設備及試劑

              微量移液器: 0.5μl-10μl、10μl-100μl、100μl-1000μl。

              一次性移液器吸頭。

              酶標儀。

              蒸餾水或去離子水。

              洗瓶或洗板機。

              樣品制備

              取動物全血,按常規方法制備血清,要求血清清亮,無溶血。

               

              洗滌液的準備

              濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫,如有鹽結晶,搖動使結晶的鹽溶解,然后用蒸餾水或去離子水作10倍稀釋。稀釋好的洗滌液可在4℃存放一周左右。

               

              樣品的稀釋

              在血清稀釋板中按1100的體積比稀釋待檢血清(例如:495μl樣品稀釋液中加5μl待檢血清)。

              注意:陰性和陽性對照不用稀釋。取每個樣品后都要更換吸頭,準確記錄每個樣品在板上的位置。每個樣品在加入到包被板微孔前應充分混勻。

               

              注意事項

              試劑盒使用前各試劑應平衡至室溫,使用前應搖勻,使用后放回2-8℃。

              不同品種、不同批號試劑盒的試劑組分不得混用,使用試劑時應防止試劑污染。

              終止液對皮膚和眼可能有刺激性,使用時應該注意防護。

              顯色液不要暴露于強光和避免接觸氧化劑。

              檢測板拆封后應避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥劑放于自封袋中,并盡快置于2-8)。

              所有廢棄物在丟棄之前應合理處理以免污染。

              嚴格遵守操作說明可以獲得最好的結果。操作過程中移液、定時和洗滌等的全部過程必須精確。

              血清稀釋板為一次性用品,不得重復使用;血清稀釋板的最大容量為300μl/孔。

               

              操作步驟

              取預包被的檢測板(根據樣品多少,可拆開分次使用),將稀釋好的待檢血清取100μl加入到檢測板孔中。同時設同時設陰性對照2孔,陽性對照1孔,取陰性及陽性對照各100μl分別加入反應孔中。輕輕振勻孔中樣品(勿溢出)。

              蓋上封板膜,置37℃溫育30分鐘。

              小心揭開封板膜,甩掉板孔中的溶液,使用工作濃度洗滌液每孔加250ul,后甩去孔內液體,以上步驟重復5次,最后在干凈吸水紙上拍干。

              每孔加酶結合物100μl,蓋上封板膜,置37℃溫育30分鐘。

              小心揭開封板膜,甩掉板孔中的溶液,洗滌5, 方法同3。切記最后在干凈吸水紙上拍干。

              加顯色液100μl,蓋上封板膜37℃閉光顯色10分鐘。

              每孔加終止液50μl,使反應終止,10分鐘內測定結果。

               

              結果判定

              用酶標儀于450nm630nm作參比波長)讀取吸光度OD值。

              試驗成立的條件是:

              陰性對照(NOD<0.15,同時陽性對照(POD值〉0.4。

              計算方法:

              樣品OD÷陽性對照OD均值=S/P

              陰陽性判斷:

              S/P≥0.25判斷為陽性;

              S/P<0.25判斷為陰性。

               


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