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              豬瘟抗體檢測試劑盒(阻斷ELISA)

                   產品編號:100702

                   檢測方法:阻斷ELISA

                   檢測樣品:血液

                   規格:96T/192T


                

              豬瘟抗體檢測試劑盒(阻斷ELISA)




              clas


              sical swine fever,CSF)抗體檢測試劑盒用于檢測豬血清中的豬瘟抗體,評估豬場豬瘟疫苗免疫狀況。

              ELISA法,在酶標板條微孔上預包被豬瘟抗原。在試驗中,加入稀釋后的待檢血清,經過溫育后,若樣品中含有豬瘟抗原特異性抗體,則與包被板上的抗原結合,經洗滌除去未結合的抗體和其他成分后;再加入酶標的抗豬瘟抗體,樣本中的抗體阻斷了酶標抗體與包被板上抗原的結合;經洗滌除去未結合的酶結合物;在微孔中加入TMB底物液,經酶催化產生的藍色信號與樣本中的抗體含量成反比,加入終止液終止反應后,用酶標儀450nm波長測定反應孔中的吸光度A值。

              需自備的設備及試劑

              1. 微量移液器:10μl-100μl、100μl-1000μl。

              2. 一次性移液器吸頭。

              3. 量筒:500ml。

              4. 96孔板酶標儀。

              5. 蒸餾水或去離子水。

              6. 洗瓶或洗板機。

              樣品制備

              取動物全血,按常規方法制備血清,要求血清清亮,無溶血。

              洗滌液的準備

              濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫,如有鹽結晶,搖動使結晶的鹽溶解,然后用蒸餾水或去離子水作10倍稀釋。稀釋好的洗滌液可在4℃存放一周左右。

              注意事項

              1. 試劑盒使用前各試劑應平衡至室溫,應將試劑盒各組份放置室溫至少1小時以上。使用前應搖勻,使用后放回2-8℃。

              2. 不同品種、不同批號試劑盒的試劑組分不得混用,使用試劑時應防止試劑污染。3. 終止液對皮膚和眼可能有刺激性,使用時應該注意防護。

              4. TMB(顯色液)不要暴露于強光和避免接觸氧化劑。

              5. 檢測板拆封后應避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥劑放于自封袋中,并盡快置于2-8)。

              6. 所有廢棄物在丟棄之前應合理處理以免污染。

              7. 嚴格遵守操作說明可以獲得最好的結果。操作過程中移液、定時和洗滌等的全部過程必須精確。

              8. 抗原包被板為一次性用品,不得重復使用;

              操作步驟

              1. 每次試驗均設置陽性對照1孔、陰性對照2孔,陰、陽性對照不用稀釋,直接取100ul加入反應孔。

              2. 將樣品稀釋液按80ul/孔加入到微孔反應板內,之后將待檢樣品血清按20ul/孔加入孔內并吹打混勻(移液器槍頭請勿混用);

              3. 蓋上封板膜(可按實際需要自行裁剪),置37℃溫育60分鐘。

              4. 小心揭開封板膜,甩掉板孔中的溶液,使用工作濃度洗滌液每孔加250ul,后甩去孔內液體,以上步驟重復4-6次,最后在干凈吸水紙上拍干。

              5. 每孔加酶結合物100μl,蓋上封板膜,置37℃溫育30分鐘。

              6. 小心揭開封板膜,甩掉板孔中的溶液,洗滌4-6, 方法同4。切記最后在干凈吸水紙上拍干。

              7. 每孔加顯色液100μl,混勻、蓋上封板膜37℃閉光顯色

              15分鐘。

              1. 每孔加終止液50μl,使反應終止,10分鐘內測定結果。

              結果判定

              用酶標儀于450nm630nm作參比波長)讀取吸光度OD值。

              試驗成立的條件是:

              陰性對照(NOD>0.5,同時陽性對照(P)阻斷率>50%;

              計算方法:

              PI (阻斷率)=  1 —(樣品OD值 ÷ 陰性OD均值)

              陰陽性判斷:

              PI(阻斷率)>40%則判斷為陽性;

              PI=<40%PI>30%為可疑;

              PI<=30%則判斷為陰性。

              貯存方法: 2 - 8oC下貯存。

              有效期: 12個月。

               


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