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              小反芻獸疫抗體檢測試劑盒(競爭ELISA)

              產品編號:100806

              檢測方法:Elisa試驗

              檢測樣品:血清

              規格:96T/192T


                

              小反芻獸疫抗體檢測試劑盒(競爭ELISA)




              羊小反芻獸疫(peste des petits ruminants virus,PPRV)抗體檢測試劑盒用于檢測血清中的PPRV抗體,評估羊小反芻獸疫疫苗免疫狀況及感染羊的血清學輔助診斷。

              本試劑盒采用競爭ELISA法,在酶標板條微孔上預包被小反芻獸疫抗原。在試驗中,加入待檢血清以及單抗工作液,經過溫育后,若樣品中含有特異性抗體,則與工作液中的的抗體競爭包被板上的抗原,經洗滌除去未結合的抗體和其它成分后,再加入酶標結合物,使酶與結合在板上的單抗反應,經洗滌除去未結合的酶結合物,在微孔板中加入TMB顯色液,經酶催化產生的藍色信號與樣本中的抗體含量成反比,加入終止液終止反應后,用酶標儀450nm波長測定反應孔中的吸光度A值。

              1

              抗原預包被板條

              1/2

              7

              終止液

              15ml

              2

              酶結合物

              11/22ml

              8

              陰性對照

              900ul

              3

              10倍濃縮洗滌液

              100ml

              9

              陽性對照

              450ul

              4

              顯色液

              11/22ml

              10

              封板膜

              2/4

              5

              樣本稀釋液

              100ml

              11

              說明書

              1

              6

              單抗工作液

              6/12ml




               

              組份

               

              需自備的設備及試劑

              1.    微量移液器:10μl-100μl、100μl-1000μl。

              2.    一次性移液器吸頭。

              3.    量筒:500ml。

              4.    96孔板酶標儀。

              5.    蒸餾水或去離子水。

              6.    洗瓶或洗板機。

               

              樣品制備

              取動物全血,按常規方法制備血清,要求血清清亮,無溶血。

               

              洗滌液的準備

              濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫,如有鹽結晶,搖動使結晶的鹽溶解,然后用蒸餾水或去離子水作10倍稀釋。稀釋好的洗滌液可在4℃存放一周左右。

               

              注意事項

              1.    試劑盒使用前各試劑應平衡至室溫,應將試劑盒各組份放置室溫至少1小時以上。使用前應搖勻,使用后放回2-8℃。

              2.    不同品種、不同批號試劑盒的試劑組分不得混用,使用試劑時應防止試劑污染。

              3.    底物和終止液對皮膚和眼可能有刺激性,使用時應該注意防護。

              4.    TMB(顯色液)不要暴露于強光和避免接觸氧化劑。

              5.    檢測板拆封后應避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥劑放于自封袋中,并盡快置于2-8℃)。

              6.    所有廢棄物在丟棄之前應合理處理以免污染。

              7.    嚴格遵守操作說明可以獲得最好的結果。操作過程中移液、定時和洗滌等的全部過程必須精確。

              8.    抗原包被板為一次性用品,不得重復使用。

               

              操作步驟

              1.    每次試驗均設置陽性對照1孔、陰性對照2孔。

              2.    將樣品稀釋液按20ul/孔加入到微孔反應板內,之后將陰性對照、陽性對照、待檢樣品血清按30ul/孔加入孔內,再按50ul/孔加入單抗工作液,加完后震蕩混勻(移液器槍頭請勿混用);

              3.    蓋上封板膜(可按實際需要自行裁剪),置37℃溫育45分鐘。

              4.    小心揭開封板膜,甩掉板孔中的溶液,使用工作濃度洗滌液每孔加250ul,后甩去孔內液體,以上步驟重復5次,最后在干凈吸水紙上拍干。

              5.    每孔加酶結合物100μl,蓋上封板膜,置37℃溫育30分鐘。

              6.    小心揭開封板膜,甩掉板孔中的溶液,洗滌5方法同4。切記最后在干凈吸水紙上拍干。

              7.    每孔加顯色液100μl,混勻、蓋上封板膜37℃閉光顯色10分鐘。

              8.    每孔加終止液50μl,使反應終止,10分鐘內測定結果。

               

              結果判定

              用酶標儀于450nm630nm作參比波長)讀取吸光度OD值。

              試驗成立的條件是:

              陰性對照(N)OD>0.6,陽性對照OD/陰性對照OD均值<0.3;

              計算方法:

              S/N =  樣品OD/陰性對照OD均值

              陰陽性判斷:

              S/N >0.55則判斷為陰性;

              S/N≤0.55則判斷為陽性。

               

              有效期

              貯存方法: 2 - 8oC下貯存。

              有效期: 12個月。


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